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化易AI
2025-03-10回答
细胞色素c制备的步骤包括： 1. 将新鲜或冷冻猪心洗净，去血块、脂肪和肌腱等，切条，用绞肉机绞碎。 2. 加入1.5倍的水，用1mol/L的硫酸调节pH值为4左右，常温下搅拌，浸提2h，压滤。 3. 滤液用1mol/L的氨水中和至pH=6.2，离心分离取清液。残渣再用等量水重复提取一次，合并两次提取液。 4. 提取液用2mol/L氨水调pH值为7.5，静止沉淀杂蛋白，离心，吸取上层清液。 5. 按每升提取液加入10g沸石，在不断搅拌下充分吸附40min，静置，弃去上层清液。用蒸馏水洗涤吸附有细胞色素C的沸石3次，用0.2%的氯化钠洗涤4次，再用蒸馏水洗至洗涤液澄清。 6. 过滤沸石，抽干，装入色谱柱中，并用25%的硫酸铵溶液洗脱，收集洗脱液。洗脱液中加入固体硫酸铵使浓度达45%，杂蛋白完全析出，过滤。 7. 滤液中缓慢加入三氯乙酸(20%)溶液，边加边搅拌，待细胞色素C沉淀完全析出后，离心收集沉淀。 8. 将沉淀溶于蒸馏水，用水透析至无硫酸根离子。将透析后溶液通过已处理好的Amberlite IRC 50(NH+4)树脂柱吸附，用水洗涤至澄清，再用磷酸氢二钠(0.6mol/L)和氯化钠(0.4mol/L)混合液洗脱，洗脱速要慢，一般流速为2ml/min。洗脱液再用蒸馏水透析至无氯离子为止，可得细胞色素C精品溶液。 以上信息仅供参考，具体操作请按实际需求调整。
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